原代腸癌*培養基

產品名稱：原代腸癌*培養基（Human intestine Carcinoma Cell Medium）
產品說明：原代腸癌*培養基（Human intestine Carcinoma Cell Medium）是一種為促進人源腸癌原代細胞體外生長而開發的培養基。它是一種無菌的液體混合系統，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質等。培養基基于碳酸氯鹽的緩沖體系，在5%CO2、37℃培養箱中平衡時，pH值為7.4。該培養基的配方可以提供一個理想人源腸癌原代細胞體外培養環境，選擇性地促進體外人源腸癌原代細胞的生長。

產品優勢：
(1) 培養成功率高

(2) 體外持續擴增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結果宇臨床數據接近

使用說明：
?使用前準備
（1）預冷的DMEM/F12培養基稀釋基質膠（Corning#356231）（50倍稀釋，現配現用），并取適量*覆蓋培養容器，在5%CO2 37℃包被培養容器底部0.5~3h，使用時棄上清。
（2）15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面75%酒精消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min;提前30min從4 ℃冰箱取出*培養基平衡至室溫。
?腸癌原代細胞培養
（1）至少提前半小時使用稀釋后的基質膠預鋪培養瓶/板，使用前吸棄基質膠，用稀釋液潤洗一遍。
（2）將分離并計數后的細胞懸液參考表1中細胞數量接種于培養瓶/板，補加*培養基至所需體積，輕輕搖晃混勻，75%酒精表面消毒后放置培養箱，37℃、5%CO2培養。
（3）原代細胞初次接種后2-3天內勿動（利于細胞貼壁），第一次換液建議換半液。

?腸癌原代細胞傳代
（1）鏡下觀察細胞形成克隆，且匯合度85~95%時即可傳代。
（2）培養箱中取出細胞，棄舊培養液，0.05%胰酶洗滌5秒后吸盡，再加入適量0.05%胰酶，37℃孵育，2~5 min后拿出輕拍培養瓶/板側面，顯微鏡下觀察細胞消化情況。
（3）細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用原代細胞終止培養基終止消化，并將細胞轉移至離心管中，1500 rpm, 3min。
（4）棄上清，以1~5mL條件培養基重懸細胞，活細胞計數，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養瓶/板，（不同規格培養瓶/板底面積、接種原代細胞數量、添加滋養細胞數量如表1所示），補加培養基至所需體積，十字交叉混勻，培養容器75%表面消毒后置37℃、5%CO2培養箱培養。其他步驟同上。
注意事項：

1. 本產品在使用前需平衡至室溫。

2. 使用產品時應注意無菌操作，避免污染。

3. 本產品中不含血清，含有原代細胞專用抗生素，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可直接使用。

4. 樣本需為腫瘤組織，且腫瘤細胞比例越高（>50%），培養成功率越高。

5. 為保持本產品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。

6. 請于保質期內使用本產品，超出保質期，必須放棄使用。

7. 傳代消化時切記不要消化過度，不宜超過5min，對細胞造成損傷，影響細胞狀態。

8. 本產品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。