神經母細胞瘤條件重編程培養基

產品名稱：原代神經母細胞瘤條件重編程培養基(Human Neuroblastoma Conditional Reprogramming Medium)
產品說明：原代神經母細胞瘤條件重編程培養基（Human Neuroblastoma Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進人源神經母細胞瘤原代細胞體外生長而開發的培養基。它是一種無菌的液體混合系統，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質等。該培養基產品基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO2、37℃培養箱中平衡時，pH值為7.4。該培養基的配方可以提供一個理想人源神經母細胞瘤原代細胞體外培養環境，選擇性地促進體外人源神經母細胞瘤原代細胞的生長。實現了體外培養周期短、成本可控、操作便捷的目的，提高了腫瘤組織原代細胞培養成功率。

產品優勢：
(1) 培養成功率高

(2) 體外持續擴增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結果宇臨床數據接近

使用說明
?使用前準備
(1) y射線照射過的NIH-3T3細胞（40Gy輻照）。
(2)15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細胞培養基平衡至室溫。
?神經母細胞瘤原代細胞培養
（1）獲取的人源神經母細胞瘤原代細胞，按照表1中細胞數接種在合適的培養器皿中，加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞（添加滋養細胞數量如表1和表2所示）。
（2）原代細胞初次接種后2~3天勿動（利于細胞貼壁），培養過程中若培養基顏色變黃但細胞未長滿時可進行半換液。
（3）鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時，適量補充γ 射線輻照后的3T3細胞（一般補加初始數目的一半）。

注∶針對實體瘤樣本，細胞粒徑大于12微米進行計數;倍增時間>48小時則定義為增殖較慢的細胞;對于增殖較快細胞，可以綜合倍增時間、接種器皿的規格以及培養周期來估算接種的細胞數量;表格供參考，具體實驗具體對待。
?神經母細胞瘤原代細胞傳代
（1）鏡下觀察細胞形成克隆及神經元樣細胞增殖，且匯合度85~95%時即可傳代。
（2）培養箱中取出細胞，棄舊培養液，0.05%胰酶洗滌5秒后吸盡，再加入適量0.05%胰酶，37℃孵育，2~5 min后拿出輕拍培養瓶/板側面，顯微鏡下觀察細胞消化情況。
（3）細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用原代細胞終止培養基終止消化，并將細胞轉移至離心管中，1500 rpm,3 min。
（4）棄上清，以1~5mL條件培養基重懸細胞，活細胞計數，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養瓶/板，加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞（不同規格培養瓶/板底面積、接種原代細胞數量、添加滋養細胞數量如表1、表2 所示），補加條件培養基至所需體積，十字交叉混勻，培養容器75%表面消毒后置37℃、5%CO2培養箱培養。其他步驟同上。
注意事項：
1.本產品在使用前需平衡至室溫。
2.本產品中含有胎牛血清和原代細胞專用抗生素，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可直接使用。
3.樣本需為腫瘤組織，且腫瘤細胞比例越高（>50%），培養成功率越高。
4.為保持本產品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。
5.請于保質期內使用本產品，超出保質期，必須放棄使用。
6.原代細胞初次接種時會貼壁較慢和貼壁不牢，若無必要，盡量減少取出觀察的次數，建議2~3天一次。
7.傳代消化時切記不要消化過度，不宜超過5min，對細胞造成損傷，影響細胞狀態。
8.接種細胞時注意細胞密度，不可過稀或過密。
9.使用產品時應注意無菌操作，避免污染。
10.本產品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。