原代乳腺上皮細胞條件重編程培養基

產品名稱：原代乳腺上皮細胞條件重編程培養基(Human Mammary Epithelial Cell Conditional Reprogramming Medium)
產品說明：原代乳腺上皮細胞條件重編程培養基（Human Mammary Epithelial Cell Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進乳腺原代細胞體外生長而設計的培養基。它是一種無菌的液體混合系統，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質等。該培養基產品基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO₂/95%空氣的培養箱中平衡時，pH值為7.4。該培養基的配方可以提供一個理想平衡的營養環境，選擇性地促進體外人乳腺原代細胞的生長，實現體外培養周期短、成本可控、操作便捷的目的。

產品優勢：
(1) 培養成功率高

(2) 體外持續擴增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結果宇臨床數據接近

使用說明
?使用前準備
(1) y射線照射過的NIH-3T3細胞（40Gy輻照）。
(2)15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細胞培養基平衡至室溫。
?乳腺原代上皮細胞培養
(1)人乳腺組織經消化酶消化后，經100微米篩網過濾后計數，按照表1中的細胞數接種在合適的培養器皿中，加入y 射線輻照后的NIH-3T3細胞（添加滋養細胞數量如表1和表2所示）。
(2)原代細胞初次接種后2-3天勿動（利于細胞貼壁）），培養過程中若培養基顏色變黃但細胞未長滿時可換半液，鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時，適量補充y射線輻照后的3T3細胞（一般補加初始數目的一半））。

注∶以上表格僅供參考。倍增時間>48小時則定義為增殖較慢的細胞∶對干增殖較快細胞.可以綜合倍增時間、接種器皿的規格以及培養周期來估算接種的細胞數量。具體實驗需按具體情況對待。
?乳腺原代上皮傳代
(1)鏡下觀察細胞形成克隆，且匯合度達到80~90%時即可傳代。
(2)培養箱中取出細胞，棄舊培養液，0.25%胰酶洗滌30秒后吸盡，再加入適量TrypLE™ Express酶 (Gibco#12605010)，37℃孵育，10-20min后拿出輕拍培養瓶/板側面，顯微鏡下觀察細胞消化情況。
(3)待消化至細胞變圓并開始脫落時用含10%胎牛血清的DMEM培養基終止消化，并將細胞轉移至離心管中， 300g, 5min離心。
(4)棄上清，以1-2mL本細胞培養基產品重懸細胞，活細胞計數，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養瓶/ 板。
(5)之后,加入丫射線輻照后的NIH-3T3細胞(不同規格培養瓶/板底面積、接種原代細胞數量、添加滋養細胞 數量如表1和表2所示)，在培養板/孔中補加乳腺原代上皮細胞培養基至所需體積，輕輕揺晃混勻，表面消毒后置培養箱，37℃、5% CO2條件培養其他步驟同上。
注意事項：

1.本產品在使用前需平衡至室溫。
2.本產品中含有胎牛血清和原代細胞專用抗生素，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可直接使用。
3.為保持本產品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。
4.請于保質期內使用本產品，超出保質期，必須放棄使用。
5.原代細胞初次接種時會貼壁較慢和貼壁不牢，若無必要，盡量減少取出觀察的次數，建議2-3天一次。
6.傳代消化時切記不要消化過度，對細胞造成損傷，影響細胞狀態。
7.接種細胞時注意細胞密度，不可過稀或過密。
8.使用產品時應注意無菌操作，避免污染。
9.本產品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。