原代食管癌條件重編程培養基

產品名稱：原代食管癌條件重編程培養基(Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)
產品說明：原代食管癌條件重編程培養基（Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進食管鱗癌原代細胞體外生長而設計的培養基。它是一種無菌的液體混合系統，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質等。該培養基產品基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO2/95%空氣的培養箱中平衡時，pH值為7.4。該培養基的配方可以提供一個理想平衡的營養環境，選擇性地促進體外人食管鱗癌原代細胞的生長。

產品優勢：
(1) 培養成功率高

(2) 體外持續擴增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結果宇臨床數據接近

使用說明
?使用前準備
（1）y射線照射過的NIH-3T3細胞（40Gy輻照）。
（2）15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細胞培養基平衡至室溫。
?食管癌原代細胞培養
（1）初次分離的食管癌小樣本細胞懸液一般無需計數，直接種入12孔板中。
（2）食管癌術中樣本過70微米篩網后計數，按照表1中細胞數接種在合適的培養器皿中，加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞（添加滋養細胞數量如表1和表2所示）。
（3）原代細胞初次接種后2-3天勿動（利于細胞貼壁），培養過程中若培養基顏色變黃但細胞未長滿時可換半液，鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時，適量補充γ射線輻照后的3T3細胞（一般補加初始數目的一半）。

注∶針對實體瘤樣本，細胞粒徑大于10微米進行計數;倍增時間>48小時則定義為增殖較慢的細胞;對于增殖較快細胞，可以綜合倍增時間、接種器皿的規格以及培養周期來估算接種的細胞數量;表格供參考，具體實驗具體對待。
?食管癌原代細胞傳代
(1) 鏡下觀察細胞形成克隆，且匯合度達到80~90%時即可傳代。
(2) 培養箱中取出細胞，棄舊培養液，0.25%胰酶洗滌30秒后吸盡，再加入適量0.05%胰酶，37℃孵育，5 min后拿出輕拍培養瓶/板側面，顯微鏡下觀察細胞消化情況。
(3) 細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用終止培養基終止消化，并將細胞轉移至離心管中，1500rpm離心3 min。
(4) 棄上清，以1-2mL相對應的原代細胞培養基重懸細胞，活細胞計數，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養瓶/板，加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞（不同規格培養瓶/板底面積、接種原代細胞數量、添加滋養細胞數量如表1或表2所示）。
(5) 補加原代細胞培養基至所需體積，輕輕搖晃混勻，表面消毒后置培養箱，37℃、5%CO2條件培養。

注意事項：

1.本產品在使用前需平衡至室溫。
2.本產品中含有胎牛血清和原代細胞專用抗生素，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可直接使用。
3.為保持本產品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。
4.請于保質期內使用本產品，超出保質期，必須放棄使用。
5.原代細胞初次接種時會貼壁較慢和貼壁不牢，若無必要，盡量減少取出觀察的次數，建議2-3天一次。
6.傳代消化時切記不要消化過度，對細胞造成損傷，影響細胞狀態。
7.接種細胞時注意細胞密度，不可過稀或過密。
8.樣本需為食管鱗癌術中或內鏡樣本，且腫瘤細胞比例越高（至少>50%），培養成功率越高，不推薦用于少量樣本（如循環腫瘤細胞）的培養。
9.使用產品時應注意無菌操作，避免污染。
10.本產品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。