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原代食管癌條件重編程培養基

簡要描述:原代食管癌條件重編程培養基(Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)是一種為促進食管鱗癌原代細胞體外生長而設計的培養基。

  • 產品型號:型號齊全
  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2023-07-08
  • 訪  問  量:580
詳情介紹

產品名稱原代食管癌條件重編程培養基(Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)
產品說明原代食管癌條件重編程培養基(Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)是一種為促進食管鱗癌原代細胞體外生長而設計的培養基。它是一種無菌的液體混合系統,含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質等。該培養基產品基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5%CO2/95%空氣的培養箱中平衡時,pH值為7.4。該培養基的配方可以提供一個理想平衡的營養環境,選擇性地促進體外人食管鱗癌原代細胞的生長。

產品優勢
(1) 培養成功率高

(2) 體外持續擴增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結果宇臨床數據接近

使用說明
?使用前準備
(1)y射線照射過的NIH-3T3細胞(40Gy輻照)。
(2)15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細胞培養基平衡至室溫。
?食管癌原代細胞培養
(1)初次分離的食管癌小樣本細胞懸液一般無需計數,直接種入12孔板中。
(2)食管癌術中樣本過70微米篩網后計數,按照表1中細胞數接種在合適的培養器皿中,加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞(添加滋養細胞數量如表1和表2所示)。
(3)原代細胞初次接種后2-3天勿動(利于細胞貼壁),培養過程中若培養基顏色變黃但細胞未長滿時可換半液,鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時,適量補充γ射線輻照后的3T3細胞(一般補加初始數目的一半)。

注∶針對實體瘤樣本,細胞粒徑大于10微米進行計數;倍增時間>48小時則定義為增殖較慢的細胞;對于增殖較快細胞,可以綜合倍增時間、接種器皿的規格以及培養周期來估算接種的細胞數量;表格供參考,具體實驗具體對待。
?食管癌原代細胞傳代
(1) 鏡下觀察細胞形成克隆,且匯合度達到80~90%時即可傳代。
(2) 培養箱中取出細胞,棄舊培養液,0.25%胰酶洗滌30秒后吸盡,再加入適量0.05%胰酶,37℃孵育,5 min后拿出輕拍培養瓶/板側面,顯微鏡下觀察細胞消化情況。
(3) 細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用終止培養基終止消化,并將細胞轉移至離心管中,1500rpm離心3 min。
(4) 棄上清,以1-2mL相對應的原代細胞培養基重懸細胞,活細胞計數,將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養瓶/板,加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞(不同規格培養瓶/板底面積、接種原代細胞數量、添加滋養細胞數量如表1或表2所示)。
(5) 補加原代細胞培養基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后置培養箱,37℃、5%CO2條件培養。

注意事項:

1.本產品在使用前需平衡至室溫。
2.本產品中含有胎牛血清和原代細胞專用抗生素,如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗,可直接使用。
3.為保持本產品的理想使用效果,不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。
4.請于保質期內使用本產品,超出保質期,必須放棄使用。
5.原代細胞初次接種時會貼壁較慢和貼壁不牢,若無必要,盡量減少取出觀察的次數,建議2-3天一次。
6.傳代消化時切記不要消化過度,對細胞造成損傷,影響細胞狀態。
7.接種細胞時注意細胞密度,不可過稀或過密。
8.樣本需為食管鱗癌術中或內鏡樣本,且腫瘤細胞比例越高(至少>50%),培養成功率越高,不推薦用于少量樣本(如循環腫瘤細胞)的培養。
9.使用產品時應注意無菌操作,避免污染。
10.本產品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。


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