如何選擇熒光蛋白
熒光標記在生物學的各個研究領(lǐng)域擁有廣泛的應(yīng)用,已成為探索體內(nèi)或細胞結(jié)構(gòu)與功能的重要工具。通常存在兩種熒光標記方式,一是利用細胞表達的熒光蛋白,另一是采用化學合成的熒光分子。下面讓我們一起來看看該如何選擇熒光蛋白吧!
1.激發(fā)波長/發(fā)射波長:每一種熒光蛋白都具備d特的激發(fā)波長和發(fā)射波長,因此,所選熒光蛋白必須與實驗系統(tǒng)的激發(fā)和檢測能力相匹配。
2.寡聚反應(yīng):首代熒光蛋白易于形成寡聚體,當其與目標基因融合表達時,可能會對目標基因蛋白的生物學功能產(chǎn)生影響。因此,在融合表達時,建議使用單體熒光蛋白,如mCherry或EGFP。
3.氧氣:許多熒光蛋白的成熟過程需要氧氣參與,尤其是源自GFP的熒光蛋白,如EGFP、ECFP和EYFP。若這些熒光蛋白處于缺氧環(huán)境中,可能無法觀察到熒光信號。
4.成熟時間:熒光蛋白的成熟時間指的是其正確折疊和發(fā)色團形成所需的時間,此過程可能持續(xù)幾分鐘至數(shù)小時。因此,在選擇合適的熒光蛋白時,考慮其成熟時間非常必要。
5.溫度:溫度對熒光蛋白的成熟時間和熒光強度有影響。
6.亮度:熒光蛋白的亮度由消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積計算得出。在許多情況下,與EGFP相比較熒光蛋白的亮度,發(fā)現(xiàn)某些熒光蛋白十分暗淡,因此,亮度也是需要考慮的因素之一。
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