隨著上周WHO宣布猴痘疫情進(jìn)入全球突發(fā)公共事件以來(lái),猴痘診斷檢測(cè)開(kāi)發(fā)和注冊(cè)又在行業(yè)掀起一波熱潮。今年,剛果民主共和國(guó)已發(fā)現(xiàn)超過(guò)15600例猴痘病例和537例死亡病例,兒童受到嚴(yán)重影響。2022年WHO建議對(duì)符合猴痘疑似病例的患者進(jìn)行檢測(cè),主要檢測(cè)方法為分子核酸技術(shù),如qPCR或LAMP,因?yàn)榉肿訖z測(cè)技術(shù)具有靈敏度和準(zhǔn)確性,是猴痘診斷的必要實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。zuihao的診斷樣本類型是直接從皮疹中獲得,如皮膚樣本、液體或痂皮。如果沒(méi)有皮膚病變,可以使用口咽或直腸拭子進(jìn)行檢測(cè)(不建議使用血液樣本)。隨著猴痘的繼續(xù)擴(kuò)散,為了解猴痘病毒的傳播途徑而展開(kāi)了更多研究,WHO的建議也發(fā)生了變化,包括新的檢測(cè)樣本類型和新的診斷方法如血清學(xué)檢測(cè)??偟膩?lái)說(shuō),早期診斷、隔離、有效的接觸者追蹤和疫苗接種將是有效控制疫情的關(guān)鍵。
二、猴痘病毒分子檢測(cè)
在CDC曾今發(fā)布的猴痘病毒qPCR檢測(cè)方法中推薦了猴痘分子檢測(cè)的試驗(yàn)設(shè)置和程序,該指導(dǎo)中推薦理想的猴痘樣本類型是儲(chǔ)存在病毒保存液(VTM)中的皮膚病變樣本。CDC和WHO建議,應(yīng)從疑似猴痘感染患者的皮膚病變處取得至少兩份樣本,最好是從身體的不同位置和不同外觀的病變處獲得。也可以使用口咽拭子,但是這種樣本類型用于診斷猴痘的準(zhǔn)確性數(shù)據(jù)目前有限。從全血中提取的DNA被認(rèn)為不是合適的樣本,因?yàn)樵谄ふ畎l(fā)作時(shí)感染的病毒期可能已經(jīng)過(guò)去。為了提高檢測(cè)能力,越來(lái)越多的體外診斷制造商正在根據(jù)CDC和WHO的建議開(kāi)發(fā)新的猴痘分子檢測(cè)。選擇與病變拭子和VTM精確匹配的最佳試劑是開(kāi)發(fā)高靈敏度和高特異猴痘檢測(cè)的關(guān)鍵。盡管VTM可用于維持病毒的穩(wěn)定性,但有些VTM的配方會(huì)滅活病毒和細(xì)菌,其中某些成分可能會(huì)抑制樣品中核酸酶的活性。如果在檢測(cè)前不去除或滅活這些抑制成分,就會(huì)影響分子檢測(cè)結(jié)果。
邁迪安Meridian提供幾種優(yōu)化的分子qPCR/LAMP預(yù)混液,非常適合用于開(kāi)發(fā)猴痘診斷測(cè)試,包括唾液樣本特異性qPCR/LAMP預(yù)混液。由于VTM是猴痘樣本運(yùn)輸和保存的shouxuan保存液,邁迪安的唾液樣本特異性qPCR預(yù)混液可以有效地克服VTM中存在的抑制物,提供高靈敏、高特異的快速猴痘診斷檢測(cè),適用于非洲這樣條件有限地區(qū)的高效分子POC檢測(cè)需求!
三、邁迪安猴痘分子診斷開(kāi)發(fā)相關(guān)案例
邁迪安推出的Lyo-Ready可凍干唾液直擴(kuò)LAMP預(yù)混液(MDX134)和Air-Dryable可風(fēng)干唾液直擴(kuò)qPCR預(yù)混液(MDX130)經(jīng)過(guò)優(yōu)化,可用于含有一系列含有抑制物的液體樣品,包括VTM。通過(guò)試驗(yàn),使用了專門用于MPXV檢測(cè)的引物和探針,來(lái)檢測(cè)預(yù)混液在10%VTM和20%VTM樣品中對(duì)MPXV DNA的擴(kuò)增能力。此外,還對(duì)唾液混合物樣本進(jìn)行檢測(cè),并且與NEB和Themo的預(yù)混液進(jìn)行了平行對(duì)比,以驗(yàn)證邁迪安的預(yù)混液在MPXV檢測(cè)方面的性能。
結(jié)果顯示,Lyo-Ready可凍干唾液直擴(kuò)LAMP預(yù)混液對(duì)所有樣本擴(kuò)增速度都是最快,出峰時(shí)間(TTR)最早,體現(xiàn)了更高的靈敏度和可重復(fù)性,尤其在病毒DNA拷貝數(shù)較低的情況下。Air DryableTM可風(fēng)干唾液直擴(kuò)qPCR預(yù)混液具有更強(qiáng)的可重復(fù)性,對(duì)MPXV檢測(cè)有更高的靈敏度和特異性,特別是在病毒DNA的拷貝數(shù)很低的時(shí)候。
四、邁迪安超靈敏猴痘病毒檢測(cè)原料部分列表
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) |
可凍干唾液直擴(kuò)qPCR預(yù)混液 | MDX130 |
可凍干唾液直擴(kuò)LAMP預(yù)混液 | |
可凍干qPCR預(yù)混液 | MDX021 |
可風(fēng)干qPCR預(yù)混液 | MDX082 |
可凍干LAMP預(yù)混液 | |
可風(fēng)干LAMP預(yù)混液 | MDX119 |
抗抑性qPCR預(yù)混液? | MDX013 |
Low DNA qPCR預(yù)混液 | MDX030 |
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