細胞轉染的方法

　　轉染（Transfection），是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。

　　轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。那么你知道細胞轉染的方法有什么嗎？讓我們一起來看看吧！

　　轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。

　　一、化學轉染法：

　　1.磷酸鈣法

　　原理：磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞

　　應用：穩轉，瞬轉

　　特點：不適用于原代細胞，操作簡便但重復性差，有些細胞不適用

　　2.陽離子脂質法

　　原理：帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞

　　應用：穩轉，瞬轉，所有細胞

　　特點：適用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時需除血清，轉染效果隨細胞類型變化大

　　3.DEAE-右旋糖苷法

　　原理：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞

　　應用：瞬轉

　　特點：相對簡便、結果可重復，但對細胞有一定的毒副作用，轉染時需除血清

　　二、生物轉染法

　　1.病毒介導法

　　原理：通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中

　　應用：穩轉

　　特點：可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等

　　2.逆轉錄病毒

　　應用：持定宿主

　　特點：但攜帶基因不能太大細胞需處分裂，需考慮安全因素

　　3.腺病毒

　　原理：通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中

　　應用：瞬時轉染，待定宿主

　　特點：可用于難轉染的細胞，需考慮安全因素

　　三、物理轉染法

　　1.Biolistic顆粒傳遞法

　　原理：將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在細胞內逐步釋放表達

　　應用：瞬轉

　　特點：可用于:人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞系以及原代細胞

　　2.電穿孔法

　　原理：高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入

　　應用：穩轉，瞬轉，所有細胞

　　特點：適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大

　　3.顯微注射法

　　原理：用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核

　　應用：穩轉，瞬轉

　　特點：染細胞數有限，多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞

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