免疫熒光技術是一種建立在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎之上的先進技術。它基于抗原抗體反應的原理，首先將已知的抗原或抗體標記上熒光標簽，然后使用這些熒光標記的抗體（或抗原）作為探針，用來探查細胞或組織中的相應抗原（或抗體）。那么你知道免疫熒光實驗的常見問題與注意事項嗎？讓我們一起來看看吧！
一、注意事項：
為進行免疫熒光實驗，我們需要準備細胞樣本，而這些細胞樣本有多種來源和處理方式。
一種是可以使用直接附著在蓋玻片上的貼壁細胞。這類細胞在培養時，只需將蓋玻片放入培養皿中，細胞便會在上面黏附并生長。這種方法特別適用于附著性較好的細胞類型，因為可以減少后續漂洗步驟時細胞脫落的風險。
另一種選擇是使用離心分離后的懸浮細胞，這些細胞需要制備成涂片。此外，還可以從體內組織中獲得細胞懸液，然后通過離心制備成涂片，這適用于特定實驗需求。
在選擇細胞準備方式時，需根據具體實驗的要求和所使用的細胞類型來決定，以確保最終獲得可靠的免疫熒光實驗結果。
二、常見問題：
1、無/弱染色烤片溫度過高，推薦56℃-60℃1-2h；一抗是否適用固定液和石蠟切片，使用濃度是否過低，孵育是否時間過短等。
2、非特異性背景染色是否滅活內源性過氧化物酶；孵育過程中干片；抗原熱修復過度。
3、染色過深一抗濃度過高；染色試濃度過高或孵育時間過長；染色劑濃度過高或孵育時間過長。
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