產品簡介:
三一造血人間充質干細胞高效擴增試劑盒(CT-021)適用于在體外培養人臍帶、脂肪、牙髓等多種組織來源的間充質干細胞。
產品特點:
· 無異源成份
· 細胞可穩定傳代至第16代
· 無菌,無支原體,低內毒素
· 可支持人臍帶,脂肪,牙髓,骨髓,胎盤來源間充質干細胞的快速增殖
保存條件:
人間充質干細胞基礎培養基與培養基添加劑 B 需 2-8°C 避光保存,有效期為 12 個月;培養基添加劑 A 需-20°C 保存,有效期 24 個月;
配制成的wan全培養基可于 2-8°C 條件下存放 4 周;
使用方法:
一、人間充質干細胞無血清wan全培養基的配制:
1. 于實驗開始時前一天,將培養基添加劑 A 從-20°C 冰箱中取出,置于 4°C 冰箱中直至wan全溶解;
2.在將培養基瓶拿進超凈臺之前,用 75%酒精對其表面進行消毒;
3.將培養基添加劑 A 和 B 加入到人間充質干細胞基礎培養基中;
4.吸取基礎培養基洗滌瓶身內壁,并重復操作一次,盡可能使培養基添加劑全部加入到基礎培養基中;
5.輕輕搖晃基礎培養基瓶身,使各成分混合均勻,搖晃時,請避免氣泡產生。將配制好的人間充質干細胞無血清wan全培養基置于2-8°C 保存。
二、人間充質干細胞的復蘇:
1.準備好 37°C 水??;
2.超凈臺中,取5mL 人間充質干細胞無血清wan全培養基于 T25 瓶中,并將培養瓶置于37°C,5% CO2培養箱中孵育30min;
3.超凈臺中,取10mL人間充質干細胞wan全培養基于15mL離心管中,待用;
4.從液氮中取出凍存的人間充質干細胞,置于-80°C冰箱中揮發管中液氮,而后迅速將凍存管置于
37°C 溫水中,并快速晃動凍存管,使其內含物盡快融化,待凍存管內含物融化wan全后取出;
5.在將凍存管拿進超凈臺之前,用 75%酒精對其表面進行消毒;
6.輕輕重懸細胞,并將其移入待用的裝有 10mL 人間充質干細胞wan全培養基的 15mL 離心管里;
7.用 1mL 培養基再次沖洗凍存管,并將此懸液移至離心管中,輕輕吹打混勻;
8.室溫下,300g 離心 10min;
9.傾去上清,往沉淀加入 2-3mL 的人間充質干細胞wan全培養基,輕輕吸打均勻;
10.從細胞培養箱中取出已預先孵育 30min 的 T25 瓶,吸去培養瓶中的液體;
11.將細胞按 0.8-1.0×104 個活細胞/cm2 的密度接種到 T25 瓶中,并加入足量的人間充質干細胞無血清wan全培養基,輕輕搖晃培養瓶,使細胞分布均勻;
12.將細胞置于 37°C,5% CO2 的細胞培養箱中培養;
13.第二天,更換新鮮的人間充質干細胞無血清wan全培養基;
14.每隔兩天更換一次新鮮的培養基,直至細胞生長至 80-90%的匯合度。
三、人間充質干細胞的傳代:
1.將 PBS,胰酶置于 37°C 水浴鍋中預熱;
2.超凈臺中,吸去培養瓶中的培養液;
3.輕輕加入5mL PBS于T25 瓶中,輕輕晃動洗滌細胞后吸去PBS,共洗滌兩次;
4.加入 2mL 濃度為 0.05%的胰酶,輕輕晃動,使胰酶溶液均勻覆蓋培養瓶底面。顯微鏡下,當70-80%的細胞變圓時輕拍培養瓶,并立即加入10mL人間充質干細胞無血清wan全培養基進行中和。輕輕吸取瓶內液體反復沖洗瓶底,使細胞wan全脫落;
注意:建議使用濃度為 0.05%的胰酶,并且消化時間不宜過長,以減少胰酶對干細胞的損傷。
5.將細胞懸液轉移到15mL離心管中,300g離心10min;
6.小心去除上清,而后加入10mLPBS重懸細胞沉淀,并再300g離心10min;
7.小心去除上清,加入2-3mL人間充質干細胞無血清wan全培養基重懸細胞沉淀,按1:2或1:3的比例接種到新的T25瓶中,再次加入足量的wan全培養基,輕輕晃動培養瓶,使細胞分布均勻;
8.將細胞置于 37°C,5% CO2的細胞培養箱中培養。
產品選購:
貨號 | 產品名稱 | 規格 |
CT-004 | 人γδT細胞高效擴增試劑盒 | 2L/套 |