細胞培養做為生物學研究最基礎的技術之一,可以說是滲透科研界的方方面面。那么細胞實驗中的常見問題有哪些?應該如何解決呢?讓我們一起來看看吧!
一、如何選用細胞系培養基?
優先根據細胞來源公司提供的培養條件,。一般建議不要隨意更換培養基種類。細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基,若驟然使用與原先提供的培養條件不同的培養基,可能造成細胞形態發生變化或無法存活,以及細胞的表型功能丟失。
二、細胞發生微生物污染時,應如何處理?
直接丟棄或更換,將未受污染的細胞轉移至其它培養箱,并用消毒劑消毒培養器皿和超凈臺以及二氧化碳培養箱。如發生真菌霉菌污染,需用紫外燈照射整個細胞間,從而消除可能產生的孢子。同時排除使用試劑的污染,包括培養基和血清,可以空培試驗。
三、為何培養基用一段時間后,顏色偏紫?
培養基隨著多次開蓋會使培養液 CO2 逐漸溢出,造成培養基越來越偏堿性從而變紫,尤其是剩余的培養基越少越容易變紫??蓪⑴囵B瓶瓶蓋旋松放入二氧化碳培養箱校正溶液 PH 值,過一段時間就會變回正常。變紫的培養基是可以繼續使用的,培養細胞時在培養箱會自動恢復顏色。
四、細胞培養液變黃變渾,如何處理?
細胞培養液變黃多半是細胞密度過大,細胞增殖速度過快,產生大量酸性代謝廢物,導致細胞營養不足。而培養液變渾多半是發生了細菌污染。出現這種情況應立即進行消化傳代處理。
五、血清中出現的沉淀是什么,有影響嗎?
① 纖維蛋白,是經常出現的較大沉淀物,可達到 1~2 mm,用肉眼可觀察到;
② 膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質,是血清出現沉淀物的常見原因;
③ 磷酸鈣,也是一種常見沉淀物,通常會使血清出現渾濁,并且在 37 ℃ 培養時會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點,這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動,因此經常被誤認為是微生物污染。
這些沉淀對細胞的生長是沒有影響的,如想去除沉淀,盡量采用離心方法,不建議使用過濾方法,因為會堵塞濾膜而且會造成污染的風險。
六、細胞支原體污染如何處理?
支原體污染是比較難去除的,特別容易復發,一般建議直接更換新的細胞,如特別精貴或重要的細胞可嘗試使用四環素、大環內酯類抗生素(泰樂霉素)、喹諾酮類抗生素。
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