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【轉染小課堂】帶你了解轉染的奧妙和神奇!

 更新時間:2024-04-08 點擊量:424

轉染(Transfection):是真核細胞主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。

原理:將DNA導入細胞使得它可利用細胞自身的細胞機制表達和合成蛋白質,將RNA導入細胞則是用來通過終止翻譯來降低某特定蛋白的合成。

轉染的RNA在細胞質中發揮作用,DNA則需被轉運到細胞核中從而達到有效的轉染。在核內,DNA會被短暫表達或整合到基因組DNA而將該遺傳改變傳代到下一代細胞。

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轉染類型:

瞬時轉染:外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此,一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其他調控元件的分析,在轉染后24-96h內分析結果。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

穩定轉染:外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可以作為一種游離體整合到宿主細胞中。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸轉移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。

轉染方式:

正向轉染:細胞培養板中先加入細胞然后再加入轉染復合物的方法。例如:DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、脂質體介導法、非脂質體的脂質活化的樹枝狀分子介導法、病毒介導法等。

反向轉染:核酸和轉染試劑復合物先加入到孔板中,然后再向小孔中加入細胞。例如:顯微注射、電穿孔、基因槍等。

化學方法:使用載體分子中和或使帶負電荷的核酸帶正電荷,包括DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、非脂質體脂質分子介導法、陽離子脂質體轉染、通過其他陽離子聚合物(如聚乙烯,PEI,活化的樹枝狀分子介導法)。

生物方法:依靠病毒包裝將非病毒基因轉移到細胞中的方法(也稱為轉導),包括病毒介導法。

物理方法:將核酸直接遞送到細胞質或細胞核中,包括顯微注射、電穿孔、基因槍。

轉染影響因素:

核酸類型:質粒DNA,mRNA,siRNA,miRNAmimicinhibitors...

細胞密度:一般來說,當細胞密度達到60%~80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率,過低或過高都會影響轉染效果。

細胞類型:如原代細胞、貼壁細胞、懸浮細胞、神經細胞、腫瘤細胞、昆蟲細胞等。

細胞系的健康程度和存活力

轉染試劑類型:脂質體、非脂質體的脂質和活化的樹枝狀分子。

北京百奧創新科技有限公司提供多種形式和規格的轉染試劑,供您選擇:

一、PEI轉染試劑

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品牌產品貨號產品名稱規格

Serochem

PRIME-P100-100MG

PRIME-P100-1G

PEI Prime? 粉末,轉染級線性聚乙烯亞胺100mg/1g
Prime-AQ100-5ML
Prime-AQ100-100ML
PEI Prime? AQ 1 mg/mL 液體轉染試劑5mL/100mL
Polysciences24765-1
24765-100
PEI MAX® - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)100mg/1g
23966-1
23966-100
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K)100mg/1g
Polyplus114-15jetPRIME Transfection Reagent0.1 mL



二、脂質體轉染試劑

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品牌產品貨號產品名稱規格
Polyplus101000122in vivo-jetRNA®+ transfection reagent1 mL
ThermoFisher11668019Lipofectamine2000 transfection reagent1.5 mL
L3000015Lipofectamine3000 transfection reagent1.5 mL


三、RNAi轉染試劑

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品牌產品貨號產品名稱規格
多納DN001- 01CALNPRNAi in vitroB0.1 mL;A0.5 mL
DN001- 05B0.5 mL;A1 mL x 2
DN001- 10B1.0 mL;A1 mL x 4







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