ATCC細胞庫介紹:
ATCC(美國模式菌種收集中心),又稱為美國菌種保藏中心, 是位于馬里蘭洲洛克菲勒的一家私營的,非贏利性組織,可提供各種動植物細胞、標準品、菌株達兩萬多種。ATCC的創立源于1925年某科學委員會意識到,科學研究對于微生物的需求增大,從而萌發了一個想法:創建一個微生物相關制品供應中心。至今,ATCC向世界各地的政府、企業、科研機構提供生物制品、技術支持和培訓,成為了一個以非盈利為目的的全球性質的生物資源中心。ATCC擁有目前世界上zui大的、品種zui豐富的微生物、細胞系以及重組DNA原料,同時它也是科研工作者gogn ren的提供shijieji的可靠的研究材料的供應商。
ATCC細胞的使用方法:
1、細胞收到后的操作方法:
取25cm2培養瓶,75%酒精擦拭培養瓶,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中靜置4-6小時或隔夜,以穩定細胞狀態。然后,用75%酒精擦拭培養瓶,拆下封口膜,收集瓶內液體于50ml離心管中,1000rpm離心5min,棄上清,用6ml細胞培養基重懸,全部接種到25cm2培養瓶中,再放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。如果離心后細胞量很多,可以直接1:2分瓶培養。
2、細胞傳代:
細胞生長至覆蓋培養瓶的85%及以上面積時,收集瓶內液體于15ml離心管中,1000rpm離5min,棄上清,用12ml細胞培養基重懸細胞,按1:2的比例進行接種傳代,接種到25cm2培養瓶中,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養,2-3天更換培養液?! ?/span>
3、細胞凍存:
a、細胞生長至覆蓋培養瓶的85%及以上面積時,收集瓶內液體于15ml離心管中,1000rpm離心5min,棄上清,用適當量的凍存液(基礎培養基:FBS:DMSO=5:4:1)重懸細胞,并放置于凍存管中。
b、先將細胞凍存管放置于4℃0.5h,再放置于-20℃1.5h,然后將其移入-80℃隔夜,24h后可轉入液氮中進行長期保存。
4、細胞復蘇:
a、從液氮中取出細胞凍存管,快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。
b、將凍存管中的細胞移至含有5ml細胞培養液的15ml離心管中,然后1000rpm/min,離心5min。
c、棄上清,沉淀細胞用6ml細胞培養基重懸,接種到培養瓶中,最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。
d、第二天,換用新鮮細胞培養基繼續培養。